超大尺寸制備色譜柱以其載量大、分離效率高、可重復性好、適用范圍廣以及操作簡便等優點，在化學、生物化學等領域的大規模制備和分離中發揮著重要作用。隨著技術的不斷進步和應用領域的不斷拓展，應用前景將更加廣闊。

　　超大尺寸制備色譜柱的測定步驟：

　　1.安裝與連接：

　　-正確安裝在色譜設備上，確保連接緊密，無泄漏。連接好流動相輸送管道、檢測器等部件，檢查整個系統的氣密性或液密性。

　　2.流動相準備：

　　-根據待分離物質的性質和分離要求，選擇合適的流動相。配制流動相時，要確保溶劑的純度和準確性，按照規定的比例混合溶劑，并充分脫氣，以去除其中的氣泡，避免對測定結果產生干擾。

　　3.系統平衡：

　　-開啟流動相輸送泵，以一定的流速沖洗色譜柱，使流動相在柱內充分平衡。平衡時間一般根據色譜柱的尺寸、填料性質和流動相組成等因素確定，通常需要數倍于柱體積的流動相通過色譜柱，以確保柱內環境穩定。

　　4.進樣：

　　-當色譜柱達到平衡后，采用合適的進樣方式將樣品引入色譜柱。進樣量要根據色譜柱的載樣能力和分離要求確定，過大的進樣量可能導致柱超載，影響分離效果；過小的進樣量則可能使檢測信號過弱，降低測定的準確性。對于超大尺寸制備色譜柱，通常需要使用專門的進樣裝置或進樣技術，以確保樣品能夠均勻地分布在柱頭。

　　5.數據采集與分析：

　　-啟動色譜數據采集系統，記錄樣品在色譜柱中的分離過程。根據檢測器的類型，獲取相應的色譜圖，如紫外檢測器可得到吸光度隨時間變化的色譜圖。通過對色譜圖的分析，可以確定各組分的保留時間、峰面積、峰高等信息，從而評估色譜柱的分離性能和樣品的組成。

　　6.柱效評價：

　　-根據采集到的色譜數據，計算色譜柱的柱效指標，如理論塔板數、塔板高度等。這些指標可以反映色譜柱的分離能力和傳質效率，是評價超大尺寸制備色譜柱性能的重要參數。一般來說，柱效越高，說明色譜柱的分離效果越好。

　　7.重復性測試：

　　-為了驗證測定結果的可靠性和色譜柱的穩定性，需要進行重復性測試。即在相同的測定條件下，多次進樣并進行分析，觀察色譜峰的保留時間、峰面積等參數的一致性。如果重復性良好，說明色譜柱的性能穩定，測定結果可靠。